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      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
      我司細(xì)胞庫優(yōu)質(zhì)細(xì)胞供應(yīng):種類齊全,質(zhì)量保證,技術(shù)支持,100%放心免費(fèi)售后!自細(xì)胞庫成立至今,供應(yīng)于全國各省市地區(qū),擁有北京/深圳中科院/研究所等各大小型院校及企業(yè)。一心服務(wù)廣大師生順利實(shí)驗(yàn)研究,并給予適當(dāng)技術(shù)支持,受到大家長期以來的信任和親睞,更多合作項(xiàng)目正在準(zhǔn)備啟動(dòng)中。

      • 產(chǎn)品型號(hào):
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時(shí)間:2023-10-26
      • 訪  問  量:710
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      聯(lián)系電話:0755-28019324

      產(chǎn)品詳情
      品牌其他品牌貨號(hào)RQ-Y20121
      規(guī)格5×105cells供貨周期現(xiàn)貨
      主要用途科研試驗(yàn)

      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng),  或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。
      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物的生理環(huán)境不同時(shí)定義為其物理化學(xué)環(huán)境中,更好地理解血清的組件,所必需的增殖的生長因子的鑒定,并更好地理解細(xì)胞在培養(yǎng)的微環(huán)境(即,細(xì)胞 - 細(xì)胞相互作用,氣體的擴(kuò)散,與基質(zhì)相互作用)現(xiàn)在允許在無血清培養(yǎng)基中某些細(xì)胞系的培養(yǎng)。
      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物的主要優(yōu)點(diǎn)是操縱物理化學(xué)(即,溫度,pH,滲透壓,O2和CO2張力)和生理環(huán)境(即,激素和營養(yǎng)物濃度),其中所述細(xì)胞繁殖的能力。除溫度,將培養(yǎng)環(huán)境是由生長培養(yǎng)基進(jìn)行控制。
      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于培養(yǎng),只要我們細(xì)心操作,注意細(xì)節(jié),并不是大家說的那樣困難。對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)和有條件的客戶,建議由公司代為培養(yǎng)細(xì)胞及進(jìn)行后續(xù)研究。

      細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù):

      1. 取出細(xì)胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍

      2. 吸出細(xì)胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液

      3. 1000r/分鐘離心5分鐘,去除上清

      4. 用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃ CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)

      5. 鏡檢細(xì)胞貼壁能力,次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)

      培養(yǎng)方法:

      收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況:

      如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

      如果細(xì)胞已長滿(達(dá)80-90%)。即可進(jìn)行傳代,具體步驟如下:

      a,棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次。

      b,向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml酶液,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,迅速拿回操作臺(tái),吸取酶,加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液,輕輕吹打細(xì)胞。

      c,加入等量的的培養(yǎng)液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)

      d,傳代比例:1:2-1:3

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      小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

      保存和應(yīng)用:

      客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。

      細(xì)胞復(fù)蘇的原則:

      在實(shí)際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

      1)該細(xì)胞只能用于科研,不得用于臨床。

      2)收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

      3)仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

      4)用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺(tái)盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

      5)請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買我司提供的培養(yǎng)基。

      6)建議客戶收到細(xì)胞后qian3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。

      細(xì)胞培養(yǎng)操作

      1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

      2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

      a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

      b、加1 mL消化液培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

      c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

      3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

      a、收集細(xì)胞,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

      b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

      c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

      深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺(tái),成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng),熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì),可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性,同時(shí)又具有競爭力的價(jià)格。 公司主營ELISA試劑盒,目前可以提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬種產(chǎn)品,產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。



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